中华预防医学杂志    2020年03期 2013—2017年广州市住院儿童呼吸道合胞病毒流行特征及分子生物学分析    PDF     文章点击量:325    
中华预防医学杂志2020年03期
中华医学会主办。
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邹丽容 李振翠 钟志锋 梁丽君 宋颖超 武婕
ZouLirong,LiZhencui,ZhongZhifeng,LiangLijun,SongYingchao,WuJie
2013—2017年广州市住院儿童呼吸道合胞病毒流行特征及分子生物学分析
Epidemiology and molecular biology of respiratory syncytial virus among hospitalized children in Guangzhou from 2013 to 2017
中华预防医学杂志, 2020,54(3)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2020.03.010
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投稿日期: 2019-04-03
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2013—2017年广州市住院儿童呼吸道合胞病毒流行特征及分子生物学分析
邹丽容 李振翠 钟志锋 梁丽君 宋颖超 武婕     
邹丽容 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
李振翠 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
钟志锋 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
梁丽君 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
宋颖超 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
武婕 广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,广州 511430
摘要: 目的  分析广州人呼吸道合胞病毒(HRSV)的流行特征及遗传变异特征。方法  2013—2017年在广州两家哨点医院(广东省妇幼保健院和中山大学孙逸仙纪念医院)采集0~6岁急性呼吸道感染住院儿童的鼻咽拭子作为标本。采用逆转录PCR和巢式PCR方法进行HRSV的检测和分型,通过MEGA 6.0、NetNGlyc 1.0等软件对HRSV序列进行基因亲缘性分析以及N-糖基化位点的预测。结果  共收集鼻咽试子标本1 225份,其中男性783份,女性442份;月龄MP25P75)为8(3,24)月。共检出HRSV儿童感染者209例(17.06%),其中HRSV-A为117例(55.98%),HRSV-B为92例(44.02%)。2岁以下儿童HRSV检出率为18.83%(196例),占总阳性标本的93.78%。209例检出HRSV儿童中,32例(15.31%)还感染了至少1种其他呼吸道病毒。进化树分析显示,62株HRSV-A属于ON1基因型,2株属于NA1基因型,53株HRSV-B全部属于BA基因型。G蛋白的第二高变区在氨基酸替换,终止密码子的使用以及糖基化位点方面均具有多态性。结论  广州2岁以下儿童是感染HRSV的高发人群,ON1为HRSV-A主导基因型,BA为HRSV-B的主导基因型。多样化的氨基酸替换,某些糖基化位点的缺失与插入,体现了G蛋白作为主要保护性抗原的多样性。
关键词 :呼吸道合胞病毒,人;遗传变异;流行病学;基因型
Epidemiology and molecular biology of respiratory syncytial virus among hospitalized children in Guangzhou from 2013 to 2017
ZouLirong,LiZhencui,ZhongZhifeng,LiangLijun,SongYingchao,WuJie     
Institute of Pathogenic Microbiology, Guangdong Provincial Center for Disease Control and Prevention, Guangzhou 511430, China
Corresponding author: Wu Jie, Email: 771276998@qq.com
Abstract:Objective  To understand the genetic variation and epidemiological characteristics of human respiratory syncytial virus (HRSV) in Guangzhou.Methods  Nasopharyngeal swabs specimens were collected from 0-6 year old children hospitalized with acute respiratory infection, then HRSV was tested and genotyped by RT-PCR. Phylogenetic tree was bulit using MEGA 6.0 software. NetNGlyc 1.0 server was used to predict the potential N-linked glycosylation sites.Results  A total of 1 225 nasopharyngeal specimens were collected, including 783 males and 442 females. The median (P25, P75) age was 8 (3, 24) months. Among the 209 HRSV-positive cases (17.06%), 117 cases (55.98%) were HRSV-A and 92 cases (44.02%) were HRSV-B. The two distinct subgroups (HRSV-A and HRSV-B) alternately played dominant role to cause HRSV infection and exchange almost once every two years. The HRSV prevalence rate decreased with age. The HRSV-positive rate among children under 2 years old was 18.83% (196 cases), accounting for 93.78% of the total positive cases. There were 32 HRSV positive cases co-infected with at least one respiratory virus, with the co-infection rate of 15.31%. Phylogenetic tree analysis of the second hypervariable region (HVR2) of the G protein classified the HRSV-A specimens into ON1 (n=62) and NA1 (n=2) genotypes while all HRSV-B specimens belonged to BA genotype (n=53). The HVR2 of the G protein varied in using stop condon, amino acid substitutions, glycosylation sites.Conclusion  Children under 2 years old were the high risk population of HRSV infection in Guangzhou. ON1 genotype turned into a primary genetype of the HRSV-A subgroup while BA genotype dominated the HRSV-B subgroup. A greater diversification of amino acid substitutions, and some deletion and insertion of glycosylation sites embodied the polymorphism of G protein as main protective antigen.
Key words :Respiratory syncytial virus, human;Genetic variation;Epidemiology;Genetype
全文

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起婴幼儿、老人以及免疫力低下人群急性下呼吸道感染常见的病毒性病原体之一[1,2]。HRSV为单股负链,不分节的包膜病毒,基因全长约15.2 kb,编码11个蛋白:NS1、NS2、N、P、M、SH、G、F、M2-1、M2-2和L,其中黏附蛋白G为Ⅱ型表面糖蛋白,可以使病毒吸附到宿主靶细胞上,辅助F蛋白导致细胞融合[3]。该蛋白全长分为胞内区,跨膜区和胞外区,且胞外区具有2个黏蛋白区(也称为高变区)[4,5]。使用单克隆抗体可以将HRSV区分为A、B两个抗原型别(HRSV-A和HRSV-B),根据G蛋白基因第二高变区(pond hypervariable region,HVR2)核苷酸序列的不同,又可分别将亚型进一步分为多种基因型,其中A亚型至少含有13种基因型:GA1-7、NA1-4、SAA1和ON1[6,7];B亚型至少包含24种基因型,分别为GB1-5、BA1-12、SAB1-4、URU1-2和THB[8,9,10]
        尽管HRSV的进化特征在许多国家已经被研究,但是在中国相关的数据仍然是稀少的。本研究对2013—2017年广州HRSV的分子流行特点及基因进化特征进行分析,以便及时掌握病毒变异信息,进而为HRSV特异性治疗方法以及疫苗研发提供指导。

对象与方法  

一、对象  2013年1月至2017年12月在广州两家哨点医院(广东省妇幼保健院和中山大学孙逸仙纪念医院)进行HRSV监测。在0~6岁急性呼吸道感染住院儿童入院后24 h内采集鼻咽拭子作为标本,采集标准为:急性发热(腋温≥38 ℃)和/或异常白细胞计数,伴有任何1种呼吸症状(咽痛、咳嗽、咳痰和呼吸困难/呼吸急促)。本研究通过了广东省疾病预防控制中心伦理委员会审核(批号:W96-027E),所有研究对象均签署了知情同意书。

二、方法  

1.核酸提取与逆转录PCR分型检测:  病毒总RNA采用EZ1 Virus Mini Kit v2.0试剂盒(德国Qiagen公司)进行提取。将提取的总RNA用Ambion AgPath-ID one-step RT-PCR试剂(美国ABI公司)进行逆转录PCR扩增,检测HRSV阳性标本,所用引物:RSV-F、RSV-R,探针:RSV-Probe(表1);反应条件:45 ℃ 10 min,95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s,50 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,5个循环;95 ℃ 15 s,55 ℃ 60 s,40个循环;55 ℃收集荧光信号。对HRSV阳性标本用呼吸道合胞病毒A和B型核酸检测试剂盒(江苏硕士生物科技股份有限公司)做荧光定量PCR进行分型检测,扩增条件:50 ℃ 30 min,95 ℃ 5 min预变性后进入循环,95 ℃ 10 s,55 ℃ 10 s,共45个循环,45 ℃收集两通道荧光信号。

表1RSV阳性检测及G基因全长扩增引物和探针

2.扩增G蛋白基因序列并测序:  采用巢氏PCR方法,利用One-Step RT-PCR Reagents试剂盒(德国Qiagen公司)进行G基因全长的扩增,HRSV-A引物:RSVA-F1、R1、F2、R2,HRSV-B引物:RSVB-F1、R1、F2、R2(表1);反应条件:50 ℃ 30 min,95 ℃ 15 min,94 ℃ 60 s,53 ℃ 40 s,72 ℃ 1 min,35个循环,72 ℃最终延伸10 min,最终4 ℃保存。PCR扩增产物经2%的琼脂糖凝胶电泳鉴定后送测序公司测序(美国life公司)。

3.序列拼接及进化树构建:  采用Sequencher 5.0软件进行序列拼接。采用MEGA 6.0软件中邻接法(neighbor-joining method,NJ)进行亲缘关系进化树构建,选择Maximum Composite Likelihood作为替代模型,bootstrap选择1 000个重复次数以评估建树可信度。只有bootstrap值>70%才在分支上展现出来。

4.同源性比对及预测蛋白序列分析:  以ON67-1210(GenBank:JN257693.1。分离地点:加拿大。分离时间:2010年)为HRSV-A ON1原型株,BA4128/99B(GenBank:AY333364.1。分离地点:阿根廷。分离时间:1999年)为HRSV-B BA原型株,分别与所获得的HRSV-A、HRSV-B菌株的HVR2序列运用DNAStar计算核苷酸和氨基酸之间的相似性,并将有差异的毒株用MEGA 6.0软件将其HVR2序列翻译为蛋白序列,用BioEdit对其进行比对,用于氨基酸序列、糖基化位点分析。

5.氨基酸糖基化位点分析:  如果编码的氨基酸序列为N-X-T/S,X不能是脯氨酸,并且通过NetNGlyc 1.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc)预测其糖基化潜在值≥0.5,则认为是一个N-糖基化位点。

6.多重感染的检测:  采用荧光定量PCR对HRSV阳性标本所提取的总核酸进行流感病毒(influenza virus,IFV)、人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)、人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)、人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)、人腺病毒(adenovirus,ADV)、人冠状病毒(human coronavirus,HCoV)和人鼻病毒(human rihinovirus,HRV)7种呼吸道病毒的检测,以了解是否存在多重感染的情况,具体检测方法参考文献[11]。

三、统计学分析  采用SPSS 20.0软件进行数据整理和统计学分析。调查对象的年龄(月龄)不符合正态分布,采用MP25P75)表示;采用χ2检验比较不同年份、不同性别和年龄对象HRSV检出率差异。双侧检验,检验水准α=0.05。

结果  

一、基本情况  共收集1 225例急性呼吸道感染住院患者标本,其中男性为783例,女性442例;年龄为8(3,24)月龄,最小为0月龄,最大为6岁。

二、广州HRSV流行特征  

1.不同时间HRSV检出情况:  2013—2017年共采集1 225例儿童的咽拭子标本,HRSV总阳性率为17.06%(209例),2013—2017年阳性率为12.32%~22.66%之间,不同年份之间HRSV阳性检出率差异有统计学意义(χ2=12.63,P=0.013)。2013—2017年均在3月份左右出现HRSV流行高峰,2016—2017年HRSV在3和9月份左右分别出现流行高峰。见表2图1

表22013—2017年广州急性呼吸道感染住院儿童HRSV检出情况
图12013—2017年不同月份广州急性呼吸道感染住院儿童HRSV检出情况

2.不同年龄儿童检出HRSV情况:  男性HRSV检出率为17.75%(139例),女性为15.84%(70例),差异无统计学意义(χ2=0.73,P=0.392),见表3。0~6岁儿童中,0~6月龄HRSV检出率最高(24.77%,134例),2~6岁最低(7.07%,13例),各年龄组检出率差异有统计学意义(χ2=45.74,P<0.001),见表3。2岁以下HRSV检出率为18.83%(196例),占总检出例数的93.78%。

表32013—2017年广州急性呼吸道感染住院儿童中HRSV检出病例的性别和年龄分布情况

3.HRSV-A和HRSV-B检出情况:  209例检出HRSV儿童中,HRSV-A为117例(55.98%),HRSV-B为92例(44.02%)(表2)。HRSV-A和HRSV-B出现交替作为主导亚型的情况:2013年4月至2014年2月,HRSV-B检出率高于HRSV-A;2014年3月至2016年4月HRSV-A检出率高于HRSV-B,占主导地位;2016年5月至2017年7月以HRSV-B检出率较高;2017年8—10月仅检测到HRSV-A。

4.混合感染情况:  209例检出HRSV儿童中,有32例(15.31%)还感染了至少1种其他呼吸道病毒。32例混合感染病例中,26例(81%)为双重感染,5例(16%)病例出现3重感染,1例(3%)为5重感染。其中HPIV和HRV是最常见的混合感染病毒,占混合感染的50%(16/32)。见表4

表42013—2017年广州急性呼吸道感染住院儿童中HRSV检出病例混合感染情况

三、亲缘关系分析  共117株HRSV测序成功,其中64株为HRSV-A序列,53株为HRSV-B序列。HRSV-A G基因HRV2亲缘关系进化树显示,62条HRSV-A序列属于ON1基因型,均含有72 bp插入,其bootstrap值为100%。剩余2条序列(RSVA-073-GD-2015和RSVA-029-GD-2015)所在分支的bootstrap值虽然不足70%,但是通过BLAST获得其与参考NA1序列的相似值均大于97%。见图2。将53株HRSV-B序列与参考序列构建进化树,所获得的序列全部属于BA基因型,均含有60 bp插入。将本研究中ON1序列与ON67-1210A ON1原型株的HVR2进行比对,其核苷酸相似性为97%~100%,氨基酸相似性为93.8%~100%。所有BA基因型序列与BA4128/99BBA原型株HVR2核苷酸相似性为90.3%~93.8%,氨基酸相似性为85.0%~91.6%。见图3

图22013—2017年分离自广州急性呼吸道感染住院儿童64株呼吸道合胞病毒A型G蛋白第二高变区核苷酸序列亲缘关系进化树
图32013—2017年分离自广州急性呼吸道感染住院儿童53株呼吸道合胞病毒B型G蛋白第二高变区核苷酸序列亲缘关系进化树

四、预测氨基酸分析  本研究所获得的ON1型HRSV-A菌株HVR2均具有24aa的插入,由于点突变存在,故和ON1原型株完全拷贝前23aa的情况不同。不同序列发生氨基酸替换的位置不同,T249I、E262K、L274P和L298P常出现在不同的序列中。
        广州BA型菌株序列长度有312aa和319aa两种,没有与BA原型株长度相同的序列(315aa)。与BA原型株相比,K218T和I281T替换在所有广州HRSV-B菌株中均有发现,T254I、T270I、V271A和H287Y被发现的频率也较高。

五、预测糖基化位点分析  与ON1原型株相比,所有ON1型序列在237位均预测到N-糖基化位点;RSVA-039-GD-2016发生T320A突变,导致318位N-糖基化位点缺失。两株NA1基因型菌株237、251和318位均预测到N-糖基化位点,序列为NTT。
        43株HRSV-B在296位预测到N-糖基化位点,其序列均为NST,41株HRSV-B在310位存在糖基化位点。3株(RSVB-092-GD-2014、RSVB-047-GD-2017和RSVB-047-GD-2017)均由于发生不同位置的氨基酸突变,而在各自序列中预测到第3个N-糖基化位点。

讨论  本研究结果表明HRSV是儿童急性呼吸道感染的重要病原体,其与石家庄、杭州、重庆等地区的报道一致[12,13,14]。在0~6岁儿童中随着年龄的增长,HRSV检出率逐渐下降,且年龄多在<2岁。可能是由于个别年份收集的样品数量不足,广州2013—2017年不同年份HRSV流行的季节性存在差异,其中2016—2017年呈双峰流行特征,其与广州属于亚热带气候特点有一定的关系[15]。HRSV-A和HRSV-B出现交替作为主导亚型的情况,并且接近两年转换一次。此前,流行病学研究已经报道HRSV-A和HRSV-B会有周期性的转变,且有研究指出其交替的时间大约为两年。这种交替出现的模式被认为是由于群体免疫压力的变化所造成的[16,17]
        在中国,ON1基因型最早于2011年12月被检测到,随后重庆,上海,四川等地均报道检测出ON1基因型[18,19,20]。本研究实验室数据显示,广州初次检测到ON1基因型为2012年,2014年成为主导基因型[21]。ON1基因型在2012年首次被报道,逐渐取代了此前A亚型的主导基因型NA1,这种快速的取代很可能与72 bp的插入以及G蛋白胞外结构域的遗传多样性有关[8]。本研究结果显示,HRSV-B G蛋白基因均有60 bp的插入,虽然其bootstrap值小于70%,但是很明显聚集于BA9亚型的大分支上。自BA基因型报道以来,其已经在世界范围内作为主要基因型流行了超过15年,表明BA基因型具有很强的适应性[22]
        HRSV感染不能产生持久性的保护性抗体,使得重复感染十分常见。G蛋白氨基酸的替换以及新糖基化位点的出现,都可能是HRSV逃避免疫监视,引起反复感染的重要原因之一[23,24]。本研究中,A、B两种亚型的HRV2序列中均出现氨基酸组成、N-糖基化位点多样性,且由于突变的积累,其已经与各自原型株产生了较大的差异。虽然已经有文献报道L274P与病毒对中和抗体的抗性相关;两株NA1基因型中G232E的替换可能和提高HRSV的存活率有关[3, 25],但是图中所呈现的大部分氨基酸替换以及糖基化位点的功能性效应还没有被很好地阐明,需要进一步的研究来说明其对HRSV致病性以及传播能力的影响。
        虽然本研究对2013—2017年广州住院儿童呼吸道合胞病毒分子生物学及流行特征进行了详细地分析,但是由于之前设置的监测医院较少,导致在研究HRSV流行规律以及亲缘关系分析时,仍然受到标本来源较少的限制。

参考文献
[1]KuhdariP, BrosioF, MalaventuraC, et al. Human respiratory syncytial virus and hospitalization in young children in Italy[J]. Ital J Pediatr, 2018,44(1):50. DOI: 10.1186/s13052-018-0492-y.
[2]邹丽容,周杰,李晖,等. 2006—2009年广州急性呼吸道感染患者病毒病原学调查[J].中华预防医学杂志,2011,45(9):825-829. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2011.09.013.
[3]OgunsemowoO, OlaleyeDO, OdaiboGN. Genetic diversity of human respiratory syncytial virus circulating among children in Ibadan, Nigeria[J]. PLoS One, 2018,13(1):e0191494. DOI: 10.1371/journal.pone.0191494.
[4]MeleroJA, MasV, McLellanJS. Structural, antigenic and immunogenic features of respiratory syncytial virus glycoproteins relevant for vaccine development[J]. Vaccine, 2017,35(3):461-468. DOI: 10.1016/j.vaccine.2016.09.045.
[5]JonesHG, RitschelT, PascualG, et al. Structural basis for recognition of the central conserved region of RSV G by neutralizing human antibodies[J]. PLoS Pathog, 2018,14(3):e1006935. DOI: 10.1371/journal.ppat.1006935.
[6]PretoriusMA, van NiekerkS, TempiaS, et al. Replacement and positive evolution of subtype A and B respiratory syncytial virus G-protein genotypes from 1997-2012 in South Africa[J]. J Infect Dis, 2013,208Suppl 3:S227-237. DOI: 10.1093/infdis/jit477.
[7]ThongpanI, MauleekoonphairojJ, VichiwattanaP, et al. Respiratory syncytial virus genotypes NA1, ON1, and BA9 are prevalent in Thailand, 2012-2015[J]. Peer J, 2017,5:e3970. DOI: 10.7717/peerj.3970.
[8]HibinoA, SaitoR, TaniguchiK, et al. Molecular epidemiology of human respiratory syncytial virus among children in Japan during three seasons and hospitalization risk of genotype ON1[J]. PLoS One, 2018,13(1):e0192085. DOI: 10.1371/journal.pone.0192085.
[9]AuksornkittiV, KamprasertN, ThongkomplewS, et al. Molecular characterization of human respiratory syncytial virus, 2010-2011: identification of genotype ON1 and a new subgroup B genotype in Thailand[J]. Arch Virol, 2014,159(3):499-507. DOI: 10.1007/s00705-013-1773-9.
[10]RenL, XiaoQ, ZhouL, et al. Molecular characterization of human respiratory syncytial virus subtype B: a novel genotype of subtype B circulating in China[J]. J Med Virol, 2015,87(1):1-9. DOI: 10.1002/jmv.23960.
[11]邹丽容,武婕,宋颖超,等. 2009—2011年广东省急性呼吸道感染者病毒病原学分析[J].华南预防医学, 2016,42(2):108-112.DOI:10.13217/j.scjpm.2016.0108.
[12]曹丽洁,帅金凤,刘建华,等. 2014-2017年石家庄地区住院儿童急性呼吸道感染病毒病原学分析[J].中华实验和临床病毒学杂志,2019,33(4):400-404. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2019.04.014.
[13]于新芬,寇宇,周银燕,等.儿童急性呼吸道感染病原学特征分析[J].中华实验和临床病毒学杂志,2018,32(2):160-165. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.02.011.
[14]曹亿会,伏晓庆,徐闻,等.中国西南地区发热呼吸道症候群病原学研究[J].国际病毒学杂志,2018,25(6):370-373. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4092.2018.06.003.
[15]肖雪,张又祥,于力,等. 2011-2012年广州地区儿童呼吸道感染人合胞病毒的流行病学研究[J].广东医学,2014,35(14):2235-2237. DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2014.14.036.
[16]HuP, ZhengT, ChenJ, et al. Alternate circulation and genetic variation of human respiratory syncytial virus genotypes in Chengdu, West China, 2009-2014[J]. J Med Virol, 2017,89(1):32-40. DOI: 10.1002/jmv.24603.
[17]KhorCS, SamIC, HooiPS, et al. Displacement of predominant respiratory syncytial virus genotypes in Malaysia between 1989 and 2011[J]. Infect Genet Evol, 2013,14:357-360. DOI: 10.1016/j.meegid.2012.12.017.
[18]EshaghiA, DuvvuriVR, LaiR, et al. Genetic variability of human respiratory syncytial virus A strains circulating in Ontario: a novel genotype with a 72 nucleotide G gene duplication[J]. PLoS One, 2012,7(3):e32807. DOI: 10.1371/journal.pone.0032807.
[19]宋金华,王慧玲,石晶,等. 2008-2014年中国8省市流行的人呼吸道合胞病毒A亚型G蛋白编码基因全长序列分析[J].病毒学报, 2017, 33(6): 821-828. DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003253.
[20]SongJ, ZhangY, WangH, et al. Emergence of ON1 genotype of human respiratory syncytial virus subgroup A in China between 2011 and 2015[J]. Sci Rep, 2017,7(1):5501. DOI: 10.1038/s41598-017-04824-0.
[21]ZouL, YiL, WuJ, et al. Evolution and Transmission of Respiratory Syncytial Group A (RSV-A) Viruses in Guangdong, China 2008-2015[J]. Front Microbiol, 2016,7:1263. DOI: 10.3389/fmicb.2016.01263.
[22]HotardAL, LaikhterE, BrooksK, et al. Functional Analysis of the 60-Nucleotide Duplication in the Respiratory Syncytial Virus Buenos Aires Strain Attachment Glycoprotein[J]. J Virol, 2015,89(16):8258-8266. DOI: 10.1128/JVI.01045-15.
[23]GonzálezPA, BuenoSM, Carre?oLJ, et al. Respiratory syncytial virus infection and immunity[J]. Rev Med Virol, 2012,22(4):230-244. DOI: 10.1002/rmv.1704.
[24]MeleroJA, García-BarrenoB, MartínezI, et al. Antigenic structure, evolution and immunobiology of human respiratory syncytial virus attachment (G) protein[J]. J Gen Virol, 1997,78 (Pt 10):2411-2418. DOI: 10.1099/0022-1317-78-10-2411.
[25]MartínezI, DopazoJ, MeleroJA. Antigenic structure of the human respiratory syncytial virus G glycoprotein and relevance of hypermutation events for the generation of antigenic variants[J]. J Gen Virol, 1997,78 (Pt 10):2419-2429. DOI: 10.1099/0022-1317-78-10-2419.